尊龙凯时对ELISA实验中动物血清封闭剂的作用原理及特性进行详细解析：

一、作用原理

机械填补与吸附覆盖
动物血清中的蛋白质通过物理吸附填充ELISA板等固相载体表面的空隙，阻止后续抗体与空白位点之间的非特异性结合。此外，血清中的抗体能够优先与样本中的Fc受体结合，从而减少一抗/二抗产生的假阳性信号。

双重封闭机制

• 普通蛋白封闭：血清中的白蛋白等成分可以封闭未包被的疏水区域，类似于BSA的作用。
• Fc受体封闭：血清中的内源性IgG能够阻止样本中Fc受体与检测抗体之间的非特异性结合。

二、核心特性

特性说明

• 种属匹配性：封闭剂需与二抗来源一致（如二抗为羊抗兔，则选用羊血清），以避免交叉反应。
• 成分复杂性：含有多种蛋白（如IgG、白蛋白），封闭效果更全面，但可能引入干扰（如生物素酶系统禁用）。
• 低毒性：高质量血清经过去补体处理，能够减少对细胞或酶的抑制作用。

三、对比其他封闭剂

与BSA对比

• 优势：动物血清可以有效封闭Fc受体，适合氛围高Fc受体的样本（如组织匀浆）。
• 劣势：成本相对较高，成分复杂可能导致背景信号波动。

与脱脂奶粉对比
血清不含脱脂奶粉中的生物素或磷酸酶，适用于更广泛的检测系统。

四、使用注意事项

浓度优化
通常使用5%-10%的浓度，需通过预实验确定最佳信噪比。

避免干扰
含叠氮钠的血清不可用于HRP标记系统，因为可能抑制酶活性。此外，冻存血清应避免反复冻融，以防止蛋白降解。

替代方案
对于对Fc受体敏感的实验可以考虑使用Fab片段二抗进行封闭。

五、典型应用场景

免疫组化/荧光：优先使用同源血清以降低背景。

高Fc受体样本：适用于血液、脾脏组织等的检测。

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