基质胶在3D细胞培养、类器官研究、成瘤、侵袭及血管生成等生物医学实验中,起着“支架”的核心作用。然而,从解冻、涂布到选择合适的浓度及结果判读,稍有不慎即可能导致实验失败。基于尊龙凯时数万次实验的宝贵反馈,我们整理出了这份“避坑指南”,帮助您轻松上手,稳步获取高分数据。
保存建议
您在收到尊龙凯时的基质胶后应如何保存?请将该产品存放于-20℃的环境中;如果需要短期保存,可以在4℃下存放不超过7天。
那么是否可以反复冻融?我们不建议频繁冻融;首次解冻后,请立即分装(200µL/管),并在-20℃下保存。
关于解冻操作,冷冻状态的基质胶可以在操作前一天放置于碎冰中,随后转移至4℃的冰箱,第二天即可使用。适当延长在4℃的解冻时间,可以有效减少基质胶中的气泡。
产品类型及特点
含酚红基质胶
适用于常规实验,因其酚红的存在,在不同的温度和pH条件下液体会呈现不同的颜色变化,从明黄色到暗红色均有可能。
无酚红基质胶
对于涉及颜色检测的实验,建议使用不含酚红的基质胶,例如在胚胎内膜细胞培养中必须使用无酚红基质胶。此外,酚红是一种潜在的内分泌干扰物,可能影响实验动物体内激素的自然产生和代谢。
标准浓度与高浓度基质胶
标准蛋白浓度为8-12mg/mL,适用于Transwell实验及皮下成瘤实验;而高浓度则为18-22mg/mL,适合于较难成瘤的细胞系,通常需要在3-5分钟内形成凝胶。低生长因子的基质胶可以作为基础处理用于类器官培养及血管生成实验。
高频问题解决锦囊
皮下成瘤荷瘤不成功的原因
常见原因包括细胞处于对数生长期,密度应达到80-90%;建议选择4-6周龄的裸鼠,小于4周可能不耐受,6周以上则免疫力增强,难以成瘤。如果小鼠免疫排斥,可以考虑更换免疫缺陷程度更大的小鼠。接种后可在一周内补种一次,以增加成功率。
肿瘤生长后消失的原因多是炎症反应,肿瘤细胞被小鼠自己吸收。如后续肿瘤依旧未长出,建议更换更强免疫缺陷的小鼠。
血管生成实验中的问题
如果细胞无法形成连续的网格,建议使用状态较好且融合度达到70%-80%的HUVEC细胞。数量不足时,细胞可能无法形成连续网格;观察时间建议为4-18小时。
侵袭实验的挑战
细胞转移能力不足,可能是由于细胞活性较差,需使用活性良好的细胞进行侵袭实验。同时,应在用胰酶消化后,彻底洗去含血清的培养基。
类器官实验的注意事项
类器官的传代时间各异,一般为7-14天,需达到直径100-200µm才能传代,某些发育较慢的类器官可能需要更长时间。类器官的鉴定方法可通过显微镜和H&E染色观察,相应的生物标志物可通过免疫荧光检测确认。
若观察的形态与文献不符,可能的原因包括样本来源不同和选用的细胞因子品质差异,这些都能够影响最终的类器官形态。
产品信息
以下是尊龙凯时的基质胶产品清单:
- Ceturegel®Matrix LDEV-Free基质胶,货号40183ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix PhenolRed-Free,LDEV-Free基质胶,货号40184ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix GFR,LDEV-Free基质胶,货号40185ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix GFR,PhenolRed-Free,LDEV-Free基质胶,货号40186ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix HighConcentration,LDEV-Free基质胶,货号40187ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix HighConcentration,PhenolRed-Free,LDEV-Free基质胶,货号40188ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix HighConcentration,GFR,LDEV-Free基质胶,货号40189ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free基质胶,货号40190ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix for Organoid culture,PhenolRed-Free,LDEV-Free基质胶,货号40191ES,规格15mL/5mL/10mL
- Ceturegel®Matrix for Organoid culture,PhenolRed-Free,LDEV-FreePlus基质胶,货号40192ES,规格15mL/5mL/10mL